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    2. 文章詳情

      動物抑郁行為實驗手冊丨糖水偏好實驗測試方法、指標評價及注意事項

      日期:2022-04-08 21:52
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      摘要:糖水偏愛實驗(sucrose preference test)是檢測抑郁癥的一個典型癥狀快感缺失的經典實驗,是利用嚙齒類動物對甜味的偏好而設計一種檢測方法。動物禁食一段時間后, 同時給予白水和低濃度蔗糖水,以動物對蔗糖水的偏嗜度(蔗糖偏嗜度)為指標檢測動物是否出現快感缺失這一抑郁癥狀。

      糖水偏愛實驗(sucrose preference test)是檢測抑郁癥的一個典型癥狀快感缺失的經典實驗,是利用嚙齒類動物對甜味的偏好而設計一種檢測方法。動物禁食一段時間后, 同時給予白水和低濃度蔗糖水,以動物對蔗糖水的偏嗜度(蔗糖偏嗜度)為指標檢測動物是否出現快感缺失這一抑郁癥狀。


      該實驗在大鼠慢性應激模型中應用極為廣泛,大鼠慢性不可預知性應激模型 的建立者Katz和大鼠慢性溫和應激模型的建立者Willner 分別于1982年和1987年采用糖水實驗檢測抑郁模型動物是否出現快感缺失癥狀。此外,該實驗為抗抑郁藥起效速率研究的主要行為學檢測方法之一。


      實驗材料

      糖水偏好測試儀采用了動物舒適且熟悉的居住飼養籠(homecage),如下圖示,飼養籠是透明聚碳酸酯材料,一側裝備了不銹鋼動物食槽,另一側安裝配置了2個不銹鋼瓶嘴的飲水瓶,可輕松取下來換水和清洗,飲水瓶容量為50ml-100ml可選,標配50ml。同時,飲水瓶上標有刻度,方便實驗員統計液體消耗量??拷嬎總认路戒佊胁讳P鋼底板,動物舔水時底板與不銹鋼瓶嘴通過微弱的電流形成閉合回路,可動態全程檢測動物的舔水次數。


      糖水偏好實驗系統,XR-268 型,上海欣軟

      糖水偏好測試儀根據用戶的需求,還可以設置飲水瓶口自動門開關,增強飲水偏好選擇難度。同時,可選配外部接口模塊,實時與光遺傳、光纖記錄等第三方設備同步記錄打標。


      實驗方法


      大、小鼠糖水偏愛實驗的操作方法上略有不同,對其分別進行總結如下:

      (1) 大鼠糖水偏愛實驗:

      訓練期:動物應單籠飼養,進行48h的蔗糖飲水訓練。前24h給予兩瓶 1% ~ 2%蔗糖水,后24h,一瓶給予1%~2%蔗糖水,另一瓶給予飲用純水(中途交換兩個水瓶位置)。大鼠禁食禁水14 ~ 23h后,進行糖水偏愛指數的測定:測定 1 h 內大鼠對兩瓶水的飲用量(g)。

      (2) 小鼠糖水偏愛實驗:

      操作流程同大鼠。但在48h飲水訓練時,應全程給予1% ~ 2%蔗糖水和飲用水(中途交換兩個水瓶位置)。訓練期結束后,禁水(不禁食)9~16h,測定8~15h內(中間宜交換兩瓶位置1次) 小鼠對兩瓶水的飲用量(g)。


      評價指標


      應采用蔗糖偏嗜度( sucrose preference)作為評價指標,蔗糖偏嗜度(%) = 蔗糖水飲用量/ (蔗糖水飲用量+飲用水飲用量)×100%。

      抑郁行為判斷標準:蔗糖偏嗜度低于0. 4或者與對照組相比有顯著性減低(P< 0. 05)。

      注意事項

      1、應定期交替放置兩個瓶子的位置,以消除側面或位置偏愛的可能性。

      2、可以在一整天或選定的時間段內測量蔗糖的偏愛。如果使用選定的時間段,則在整個動物中保持一致是很重要的,因為夜間節律會影響偏好行為。

      3、可以用幾種方式來計算結果測量值,包括消耗的溶液總毫升數(甜味與不甜的比例)或每克體重消耗的蔗糖克數。雖然這兩個測量值通常在動物模型中相關,但后者可能會與壓力和焦慮有關的飲食失調行為、體重減輕有關系。

      4、參靠實驗前2周內動物的飲水量數據,控制好糖水的配比濃度、液體量以及實驗時長。

      5、在小鼠和大鼠的品系之間,在蔗糖偏愛方面也存在一些差異,比如Wistar大鼠不是特別敏感。

      6、嚙齒動物在蔗糖偏愛方面的可能還有性別差異,比如Wistar Kyoto雄性大鼠的蔗糖偏愛率低于雌性。

      7、實驗之前,動物單獨飼養通常建議48-72小時的適應時間。

      8、 大鼠或小鼠必須處于單籠條件下(即單獨的籠子中)才能進行蔗糖偏愛測試。

      9、實驗測試的整個周期里,選擇蔗糖的品牌盡量保持一致,避免其他因素對結果造成影響。

      10、評估糖水偏好測試(SPT)的實驗指標優先考慮蔗糖偏嗜度( sucrose preference),也就是蔗糖偏好比,而不是每只飲水瓶的攝入量

      11、 糖水偏好測試過程中偶爾會存在飲水瓶漏水的現象,這種情況有可能是實驗員操作失誤,有可能是飲水瓶位置放置不正確,也有可能是動物舔水過程中無意泄漏的,這些現象很多時候可能會導致在規定時間內獲取的動物舔水攝入量差異不明顯(動物單次飲水量本就很有限),這個時候用戶可以選擇糖水偏好測試儀的計算出的動物舔水次數、飲水時間、舔水頻率等數據來參考統計,或許是另一條評估的好思路。

      小tips:

      ① 在建立抑郁模型前后均做一次該實驗,效果更為明顯;

      ② 在訓練過程中12h后調換蔗糖水瓶和純水水瓶的位置,避免水瓶位置對實驗的干擾

      ③ 更加重要的是在正常實驗前一定要檢查好水瓶是否明顯漏水,以及一定要旋緊壓緊瓶蓋,實驗周期84h。



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